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产品介绍 随着研究的细化与深入,普通转录组测序(Bulk RNA-seq)所反映的群体细胞或整体组织基因表达情况已经无法满足人们更深入的研究,例如细胞与细胞之间的异质性,微环境的细微差别,而单细胞RNA-seq(scRNA-seq)测序技术可以在单细胞层面解决这类难题,该技术可实现大量细胞的快速高效标记、测序和分析,获得单个细胞水平的基因表达谱和差异情况,并通过对复杂细胞群体进行深入细致分析,绘制大规模单细胞表达图谱。单细胞RNA-seq(scRNA-seq)已经逐步成为探究复杂组织中细胞类型、分子变化和细胞功能的重要手段。 近几年来,单细胞转录组测序技术在动物研究领域应用如火如荼。该技术不仅可以识别罕见的细胞亚群,如异质肿瘤亚群,揭示炎症反应下免疫细胞之间的差异,还可以分析耐药的机制,探索新的治疗靶点,筛选受益人群,建立有效的治疗方案。这项技术突破了现有研究尺度,在生命科学和基础医学研究领域备受瞩目,为癌症治疗的发展提供了前所未有的见解。 DNBelab C4高通量单细胞转录组平台,以其低成本、高效率的检测优势将“人人都可单细胞测序”的理念又向前推进了一步。DNBelab C4采用自主设计的捕获磁珠,平均单个磁珠表面修饰有107条捕获序列,且自主研发的多磁珠识别技术,可有效提高细胞捕获效率以及获取细胞完整信息,已广泛应用在脑科学研究、哺乳动物图谱绘制研究、肿瘤发生发展机制研究、疾病血液类等研究。
分析原理 单细胞转录组测序系统的关键技术是利用上百万独特的Barcode标记不同的样品细胞。首先,含有Barcode序列的Gel beads与样品和酶的混合物混合,然后与油表面活性剂结合形成GEMs(Gel Bead-In-Emulsions,意为包裹Gel beads,样品以及酶的混合物的油滴)。收集GEMs流到储液器,Gel beads溶解释放Barcode序列,开始对样本细胞进行标记。将每个液滴中含有Barcode信息的产物混合,构建标准测序文库。 从细胞样品提取到最终数据获得,样品检测、建库、测序等每一环节都会直接影响数据的数量和质量,从而影响后续信息分析的结果。为从源头保证测序数据准确可靠,凌恩生物承诺在项目所有生产环节都严格把关,从根源上确保高质量数据的产出。单细胞转录组整体实验流程图如下: 图 单细胞核转录组测序实验流程
技术流程
技术优势 1、捕获率高:细胞捕获率70%以上; 2、稳定性好:批次间差异小,重复性好; 3、多胞率极低:10000个细胞中,多个细胞概率低于4%。 送样要求 1、新鲜样品:用提前4℃预冷的1 × DPBS或生理盐水清洗后,立即置于保存液中。 2、送样量要求:新鲜组织采集量≥ 0.2g(组织体积大小约2×0.5cm3);组织较大时,可分割为多颗粒(每颗粒≤ 0.5cm3大小)进行保存运输;细胞数目 ≥ 1 × 105个,细胞状态良好,杂质含量低,细胞活率好,无污染; 3、运输要求:将保存液保存的组织放置于2 ℃~8 ℃保存或运输,保存及运输的时间建议不超过72 h。 分析示例 |