单细胞RNA-seq(scRNA-seq)已经成为探究复杂组织中细胞类型、分子变化和细胞功能的重要手段。然而，单细胞技术要求从新鲜组织中制备单细胞悬液，获得高质量和高活性的细胞，但大量冻存样本因为无法制备高质量细胞悬液，这限制了单细胞技术的广泛应用。而单细胞水平上的核转录组测序（snRNA-seq）可以解决冻存样本中或细胞直径大的单细胞研究问题。单细胞核转录组测序可以精准获得每个细胞的表达谱特征，揭示细胞异质性，发现新的亚型、研究细胞发育和分化过程、探索细胞类型和功能，对深入了解样本中细胞间的类型划分和相互作用意义深远，是研究细胞基因表达异质性、发育分化过程、机制研究、环境响应、医学及农业育种等的重要手段。

单细胞核转录组测序系统的关键技术是利用上百万独特的Barcode标记不同的样品细胞核。首先，含有Barcode序列的Gel beads与样品和酶的混合物混合，然后与油表面活性剂结合形成GEMs（Gel Bead-In-Emulsions，意为包裹Gel beads，样品以及酶的混合物的油滴）。收集GEMs流到储液器，Gel beads溶解释放Barcode序列，开始对样本细胞核进行标记。将每个液滴中含有Barcode信息的产物混合，构建标准测序文库。

从细胞核样品提取到最终数据获得，样品检测、建库、测序等每一环节都会直接影响数据的数量和质量，从而影响后续信息分析的结果。为从源头保证测序数据准确可靠，凌恩生物承诺在项目所有生产环节都严格把关，从根源上确保高质量数据的产出。单细胞核转录组整体实验流程图如下：

图 单细胞核转录组测序实验流程

1、研究对象广，如冻存样本以及直径较大的细胞均可适用，样品保存和运输更便捷；

2、直接抽核，降低细胞类型偏好性，获取更全面的细胞类型，发现稀有细胞类型，挖掘新Marker基因；

3、避免酶消化导致应激基因表达，减少“转录偏好”；

4、核内基因更多保持了转录本的异构体和可变剪接信息；

5、与scRNA-seq在细胞分群上趋于一致，具有类似的基因检出率。

1、脑、心脏、肌肉等含有直径大于40μm细胞的组织类型。

2、送-80℃冷冻保存或过液氮的组织或细胞。建议冻存时间不宜过长。

3、组织或细胞送样量的要求：送1g或以上，大小为0.5cm³。