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产品介绍

单细胞RNA-seq(scRNA-seq)已经成为探究复杂组织中细胞类型、分子变化和细胞功能的重要手段。然而,单细胞技术要求从新鲜组织中制备单细胞悬液,获得高质量和高活性的细胞,但大量冻存样本因为无法制备高质量细胞悬液,这限制了单细胞技术的广泛应用。而单细胞水平上的核转录组测序(snRNA-seq)可以解决冻存样本中或细胞直径大的单细胞研究问题。单细胞核转录组测序可以精准获得每个细胞的表达谱特征,揭示细胞异质性,发现新的亚型、研究细胞发育和分化过程、探索细胞类型和功能,对深入了解样本中细胞间的类型划分和相互作用意义深远,是研究细胞基因表达异质性、发育分化过程、机制研究、环境响应、医学及农业育种等的重要手段。

分析原理

单细胞核转录组测序系统的关键技术是利用上百万独特的Barcode标记不同的样品细胞核。首先,含有Barcode序列的Gel beads与样品和酶的混合物混合,然后与油表面活性剂结合形成GEMsGel Bead-In-Emulsions,意为包裹Gel beads,样品以及酶的混合物的油滴)。收集GEMs流到储液器,Gel beads溶解释放Barcode序列,开始对样本细胞核进行标记。将每个液滴中含有Barcode信息的产物混合,构建标准测序文库。

从细胞核样品提取到最终数据获得,样品检测、建库、测序等每一环节都会直接影响数据的数量和质量,从而影响后续信息分析的结果。为从源头保证测序数据准确可靠,凌恩生物承诺在项目所有生产环节都严格把关,从根源上确保高质量数据的产出。单细胞核转录组整体实验流程图如下:


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单细胞核转录组测序实验流程



技术流程


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技术优势

1、研究对象广,如冻存样本以及直径较大的细胞均可适用,样品保存和运输更便捷;

2、直接抽核,降低细胞类型偏好性,获取更全面的细胞类型,发现稀有细胞类型,挖掘新Marker基因;

3、避免酶消化导致应激基因表达,减少“转录偏好”;

4、核内基因更多保持了转录本的异构体和可变剪接信息;

5、与scRNA-seq在细胞分群上趋于一致,具有类似的基因检出率。


送样要求

1脑、心脏、肌肉等含有直径大于40μm细胞的组织类型。

2、送-80℃冷冻保存或过液氮的组织或细胞建议冻存时间不宜过长。

3组织或细胞送样量的要求:1g或以上大小为0.5cm3


分析示例


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