微生物多样性测序三代全长扩增子宏基因组测序宏基因组Binning分析宏基因组抗性基因测序宏基因组元素循环测序高宿主污染去除宏基因组项目HiC-Meta宏基因组三代全长宏基因组宏转录组差异表达测序环境宏病毒组测序医学宏病毒组测序动植物基因组Denovo测序细菌基因组测序项目真菌基因组测序项目病毒基因组测序项目简化基因组遗传图谱简化基因组GWAS测序BSA混池测序基因组SSR开发基因组重测序真核有参转录组测序真核无参转录组测序原核链特异性转录组测序全长转录组(有参_无参)测序LncRNA测序Small RNA测序互作转录组测序比较转录组测序Meta-Barcoding(eDNA)技术研究5R 16S rRNA微生物多样性绝对定量 Spike-in种质资源数字化解决方案转座子插入测序(Tn-seq)PlantArray植物生理组平台UMI-RNA-seq技术染色体级别基因组组装Hi-C建库叶绿体、线粒体基因组测序高通量土壤生物检测Astral蛋白质组学植物单细胞核转录组动物单细胞核转录组动物单细胞转录组单菌株单细菌转录组人肠道单细菌转录组10x单细胞转录组单细胞转录组(SMART)测序靶向代谢组分析非靶向代谢组分析ATAC-seqChip-seqRip-seq全基因组甲基化分析扩增子引物列表资料下载送样指南客户文章列表
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产品介绍

微生物是一群以分解代谢为主的生物类群,其生物活性十分丰富。16S rDNA基因测序已经成为当前解析原核微生物群落组成及其分布的重要手段。既往研究中,受限于NGS的读长,物种鉴定存在很多不确定性。伴随着三代测序技术的发展,长度长测序技术越来越成为组学研究的主流。Pacbio平台3-5kb的平均读长可以轻而易举地覆盖16s rDNA9个高变区域,获得的序列更长,信息量也更多!16s rDNA全长测序因此成为多样性研究的新热点技术。

基于三代PacBio高通量技术对微生物16S rDNA(真菌ITS、真核生物18S rRNA)全长序列进行测序,物种能够鉴定到“种”水平,同时对样品中的优势物种、稀有物种以及一些未知的物种进行检测,获得样品中的微生物群落组成以及它们之间的相对丰度。探讨微生物多样性对于研究微生物与环境的关系、环境治理和微生物资源的利用有着重要的理论和现实意义。此外,凌恩生物还推出个性化分析服务,如:筛选微生态系统中的关键菌种、微生物群落变化的动态监测、微生物群落共生网络关系等多项个性化分析服务,为您的科研成果锦上添花。


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技术优势

1基于三代测序,在同一分类水平下,也可以实现更多的物种分类,更是在种水平物种鉴定中实现了大幅提升,这一点就很大程度满足了微生物学研究者的迫切需求。

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16s V4区与全长分类鉴定结果比较

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16s不同V区与全长未分类序列占比比较

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16s不同V区与全长未分类序列进化树比较


2基于三代技术开展16s全长扩增子研究,有更多的序列得到了明确的物种划分,尤其是针对样本中含量低微的物种,分类鉴定的效果更好。

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样本中微量物种的分类识别情况和偏好性16s二代和三代比较


3由于二代测序建库过程中有PCR扩增的步骤,难以避免由于扩增偏好性造成的物种丰度检测的偏差,可能造成某些特定微生物类群含量的检测偏差,这就难以实现对样本中微生物群落分布的真实还原。而三代测序由于不需要PCR的过程,就很大程度上降低了结果的偏差

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16s V4区与全长对物种偏好性比较


4通过聚类OTU,并与模拟物种库进行比较,V1-V9区研究实现了对样本的更真实还原,物种的识别和定量是最接近模拟物种库原貌的,这一点说明了基于三代平台的16s全长测序在保真效果上的巨大优势

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16s不同V区与全长与模拟物种库进行比较


5利用三代16s全长扩增子测序技术可以清晰的获得菌株在16s全长范围内的单核苷酸变异信息。利用这样的信息,可以更好地对菌株实现区分物种可实现“种”水平分类,结果更加准确

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技术流程

PacBio测序(扩增子全长测序):

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内容项目引物名称序列扩增产物长度
全长16S全长27F5′-AGRGTTTGATYNTGGCTCAG-3′1.5K
1492R5′-TASGGHTACCTTGTTASGACTT-3′
18S全长EukA5′-AACCTGGTTGATCCTGCCAGT-3′1.8K
EukB5′-GATCCTTCTGCAGGTTCACCTAC-3
ITS全长ITS15′- CTTGGTCATTTAGAGGAAGTAA-3′0.6-0.7K
ITS45′- TCCTCCGCTTATTGATATGC-3′



分析流程

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送样要求


样本类型1:环境样本(请使用干冰或者冰袋运送)

1)土壤≥5g

2)粪便≥2g

样本类型2DNA样品(请使用干冰或者冰袋运送)

1DNA总量1ug

2)浓度20ng/ul



分析示例


三代全长扩增子.png



部分凌恩客户文章


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2022Linarin ameliorates dextran sulfate sodium-induced colitis in C57BL/6J mice via the improvement of intestinal barrier, suppression of inflammatory responses and modulation of gut microbiotaFood Funct.6.317西北农林科技大学
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2024Seasonal and spatial variations of Synechococcus in abundance, pigment types, and genetic diversity in a temperate semi-enclosed bay
Frontiers in Microbiology5.2中国科学院海洋研究所
2023Traditional Chinese medicines (TCMs) with varied meridians (Gui-Jing) differentiallyalleviate the adverse impact of Coptis chinensis on gut microbiota
Journal of Ethnopharmacology5.195天津中医药大学中医学院