声明 凌恩生物拒绝接收《人间传染的病原微生物名录》中危害程度为第一、第二类的高致病组织、血液、细菌等样品，只接收提取得到的核酸样品。危害程度为第三、第四类的致病性或传染性的组织、血液、细菌等样品，必须事先通过销售与凌恩生物技术人员联系，确定无高致病性和传染性后才能寄送样品。样品寄送时应采用WHO提出的三级包装系统，第一层容器：装样品，要求防渗漏；第二层要求耐受性好、防渗漏，容纳并保护第一层容器；第三层容器：放在一个运输用外层包装内。在第二层包装注明“致病性样品，接收时请注意”字样，并在样品信息单上注明其危害程度及接收注意事项。此类样品寄送时销售务必邮件通知样品组，告知样品组相关寄送信息（快递单号、样品类型、样品数量）以及接收时的防护措施和注意事项。 提取风险提示和注意事项 核酸提取质量与物种及组织部位、采集方法及保存状态、提取方法及操作、实验器材及环境等因素均有密不可分的联系，尤其是三代超长提取对样本的要求更高，望知悉及理解，并做好样本备份。为了保障获得高质量的核酸，请务必按照送样手册所规定的准备样本。对珍贵样本或者微量样本，建议自行提取。 （1）组织冻存时间：样本不建议选取冻存时间过长的。组织离体后，细胞内核酸便开始降解了，因此在采集样本时，组织离体后应立即液氮速冻，时间≤5 min内完成。 （2）组织送样量：送样手册建议送样量适用于大部分物种的组织，某些组织因细胞内核酸量较低，需要适当增加送样量，例如动物皮肤、肌肉，植物根、果实等。请严格按照本送样手册的相关要求送样。 （3）组织样本保存：建议选择液氮速冻，若条件不允许，可放入-80℃冰箱冻存。若组织发生过冻融，则提取成功的可能性几乎为零，请确保组织未发生过冻融情况。样本保存时间超过一年的组织不建议送样。（动物组织可使用核酸保护液保存，但不建议使用于植物、菌类、细胞或是微量样本。） （4）送样组织部位要求：请确保寄送样本为目标组织部位，例如目标组织为叶片，动物肌肉组织等，则不能含有其他部位。提取实验无法精准取样，且不负责称重。若送样量过多，则随机选取适量组织进行提取；若样本量过少，无法进行多管混合提取，有此类特殊要求的，烦请自行提取核酸后送样。 （5）送样登记要求：所有样本均应标明准确的样本编号，同时配有一张样本登记表，写明样本名称、种类、编号、取样日期、样本处理情况等。若同一组织样本如需提取多种项目，请分成不同批次进行送样，并填写好样本信息单。 1 组织样本送样建议 （1）送样需要选择新鲜采集的样本，尤其是三代超长片段建库。样本的取材优先选择核酸含量相对较高的组织，植物样本如尽量选取幼嫩的组织，如幼叶，幼芽。海水类物种需要进行淡化处理。某些吸血性昆虫，例如蚊子，血吸虫，该类型样本需要进行切腹处理。 （2）组织提取时可能受到上下游处理操作的影响，因此较难保证单次提取满足质量要求，客户应在寄送组织样品前进行备份。 （3）对于植物样本，建议在采集样本之前，将样本置于黑暗环境24-48小时后再取材。如果需要立即取材，请尽快采集好样本后，迅速置于低温保存或运输，减少植物中化合物的氧化对核酸的影响.。 （4）对于动物样本组织样品处理及切割过程应在冰上尽可能快速进行，时间过长会导致样品降解。反复冻融和长期保存的组织有更多的降解风险。客户应确保寄送之前组织没有被反复冻融 （5）对于动物组织，液氮冷冻方式是多数组织样品选取的处理方法。详解如下： （a）组织取样前需准备好冷冻组织的足量液氮，预装样品的15/50 mL冻存管，管盖须钻孔（防止管子内液氮体积膨胀爆炸），并在离心管内加满液氮； （b）组织离体后需快速清洗，立即浸入装有液氮的冻存管中彻底冷冻（避免将样品先放入离心管，再将离心管放到液氮中）；样品彻底冷冻后，再将样品转至-80℃保存； （c）无法使用冻存管采集保存的样品，离体后仍需将样品立即浸入液氮彻底冷冻，再选用合适的容器包装，包装后需再浸入液氮中彻底冷冻一次，最后将样品转至-80 ℃保存。 （6）客户在送样之前需做好样品分离、解剖等处理，严禁寄送活体动物，提取组不便进行样品的解剖工作（如取昆虫的头部、动物的内脏等）。组织样品如需同时提取RNA和DNA，建议将样品分两份送样。 （7）血液样本要求为全血样本，并加入抗凝剂，推荐使用EDTA抗凝的采血管收集样品（由于会影响实验，不能使用肝素抗凝），冷冻后，干冰运输。应使用塑料材质的采血管送样，避免使用玻璃材质采血管送样或装液太满，以至冻裂。 1.1 DNA相关项目组织样本 1.1.1 制备建议 1.1.1.1动物样品 采集时建议活体取材后用预冷的0.9%生理盐水进行漂洗，以去除血渍和污物，并剔除结缔组织和毛发等非研究组织，将样品分割成50 mg左右的小块（约黄豆大小，组织块越小，保存效果越好），样品分割和处理时应尽量在冰上进行，防止样品降解。避免装样太满以至冻裂，造成样品污染。 1.1.1.2植物样本 新鲜组织样，取样时尽量保留叶柄，用潮湿的吸水性较好的纸或纱布包裹，不要让材料干枯，但不能太湿，以免泡坏样品，材料珍贵的样品，请一片片叶片分开包裹，不要重叠，以防叶片烂毁浪费，新鲜材料的运输，从-20℃取出的冰袋不要直接接触样品，以免造成保湿用纸结冰，导致样品局部冻伤；冻存组织样，新鲜组织摘取后，立即液氮冻存，并放入预冷的冻存管、15ml/50ml离心管或者自封袋中，然后-80℃保存。如用锡箔纸包装组织样品，折叠时需有纹理可循，并将锡箔纸放入自封袋中，避免打开锡箔纸时样品洒落，干冰运输。 1.1.1.3常见土壤样本 按实验设计确定采样范围，取样器具需事先消毒灭菌处理。采样时应去除地表杂质，根据需要挖取相应深度（如5~20 cm）的土壤，置于冰上运至实验室。去除可见杂质，建议过2 mm无菌筛网。同一样方多点样本等量混合均匀后取5~10 g，保存无菌EP管中，进行核酸提取，或-80℃保存备用。若不能自行提取，可置于干冰寄送至公司。 1.1.1.4水体样本 采样后进行滤膜过滤，选择合适孔径的滤膜，对于澄清水体或者略浑浊水体，选用0.22μm或者0.45μm的滤膜，取样体积大于5L；对于浑浊水体，建议先用大孔径的滤膜过滤一遍，再用小孔径的滤膜过滤；水体泥样的采集提供大于5g样本（其他环境采样方法请详见“环境样本采集操作指南”）。 1.1.1.5粪便样本 尽量避免尿液污染粪便，可以事先排尿，粪便尽可能排入洁净干燥容器内；用采样管中无菌勺挖取粪便中段没有接触空气和地面的部分，挖取一满勺（3-5 g）。小鼠至少3-5粒粪便；将挖取的粪便连同小勺一同放入采样管中，盖紧盖子。样品液氮速冻，置于-80℃冰箱保藏，干冰寄送到实验室。 1.1.1.6肠道内容物 在实验对象死亡后，用无菌解剖刀，在无菌状态下取出整个肠道，切取所需肠段的内容物（条件允许的话，可在无菌操作台进行）；用无菌手术刀挖取内容物，立即放在冰上进行分装并标记；用灭菌离心管分装，单个样本取样量：200-500 mg/管为保证实验顺利进行，每个样本取多管备份，在采样允许的情况下，尽量多采集样品（其他医学研究采样方法请详见“医学研究样本采集操作指南”）。 1.1.1.7特殊样品类型 多糖多酚类植物，例如；番薯；次生代谢产物较丰富的植物，例如中药材植物，需加大送样量。 脊柱动物做BioNano选择娇嫩的器官，优先选择脾脏，肝脏，肾脏。取出的组织液氮速冻，-80℃保存，干冰运输。 1.1.2 送样量建议
1.3 基因组相关项目组织样本 1.3.1 制备建议 1.3.1.1动物细胞培养 总量：大于等于1x107 个细胞。PS：有多少送多少。 准备：新鲜细胞样本或在1xPBS 中加20%的甘油和20%的DMSO，-80℃冻存。 请在样本采集表中注明每个样本的总细胞数。建议每个样本多送2-3 份，以备重复抽提。 室温运输：新鲜细胞样本在充满培养液的T25 配样瓶中运输，运输时请用恒温容器2 天内送达（避免极环境温度） 干冰运输：冷冻细胞样本请在干冰环境运输，建议每24h 需加干冰2-3公斤以上。 1.3.1.2动物组织或血液 组织材料及总量：推荐最小组织用量参见下表：
组织样本准备：新鲜组织样本，取样后迅速液氮速冻，运输前保存至-80℃。 请勿发送已固定的组织材料。保存在2-8℃或-20℃的组织样本，DNA 质量和产量会下降。 血液样本保存：新鲜血液样本采用EDTA 抗凝剂收集。建议采用涂有EDTA的血液采集管采集新鲜血液，样本采集后迅速颠倒混匀8-10 次以确保抗凝剂混匀。如采样后立即送样，请保持送样环境4℃（冰袋运输）。如需储存送样，血液样本应立即液氮速冻，并-80℃保存。 运输：新鲜血液样本应在-4℃恒温环境运输（冰袋运输），冷冻组织及血液 样本应干冰运输，建议每24h 需加干冰2-3 公斤以上。 1.3.1.3植物组织 （1）植物线粒体 植物线粒体推荐选择下胚轴，叶绿体含量极低，线粒体含量极高，更容易获得完成图。
优选植物愈伤组织。无法培养愈伤组织的，可采用白化苗（叶绿体含量极低的组织）。可进行暗培养，建议取样前植株避光培养一周，获得白化苗。取样量建议5g左右。 （2）植物叶绿体 建议取样，植物绿色组织部分（幼嫩叶片等），取样量3-5g，取样前建议光照6h 以上，使样本中合成大量叶绿体，再进行取样。取样后，样本用锡箔纸包裹（或冻存管盛放），迅速过液氮速冻，转移至-80℃冰箱内冻存。 1.3.1.4菌体 1. 液体培养基摇菌操作及取样运输 摇菌操作： 1) （a）在超净工作台中，点燃酒精灯操作。镊子头在酒精灯上炙烤灭菌（每一瓶接种都行此操作）。 2) （b）在点燃的酒精灯附近，进行液体培养基的无菌分装，将液体培养基倒入无菌的试管（~3ml）中，酒精灯燎试管口后盖上无菌塞子，备用。 3) （c）用无菌的镊子夹取无菌牙签，挑取真菌菌丝，置入含有液体培养基的试管中（此过程操作注意不要触碰试管管壁，蘸有菌丝的一头置入液体培养基中）。酒精灯燎试管口后盖上无菌塞子。 4) （d）待所有的摇菌样本准备完毕后，从超净工作台中取出试管。倾斜75度角置于37℃摇床，转速220转，培养适宜时长（肉眼可见试管浑浊）。 菌体富集：（可将菌液在超净台转移至冻存管操作） 收集5-10ml菌液离心富集，4℃，10000rpm/min，离心5min.弃上清。菌体迅速置于液氮速冻，-80℃保存。 样本运输：干冰运输。干冰用量建议以3kg/day计算。一般建议10kg起。 2. 固体培养基平板培养操作及取样运输 平板培养操作： （a）在超净工作台中，点燃酒精灯操作。接种环在酒精灯上炙烤灭菌（每个平板接种都行此操作），并冷却。 （b）在点燃的酒精灯附近，打开固体培养平板的平皿盖，用接种环挑取真菌菌丝，在培养平皿上进行划线接种（此过程操作注意不要刺破固体培养基表面）。接种后酒精灯燎平皿口，盖上平皿盖，倒置平皿。 （c）待所有的样本接种完毕后，从超净工作台中取出，置于适宜培养条件的培养箱进行培养。 样本运输：平板样本需用封口膜将平皿进行严密封口，后用冰袋进行低温快递运输即可。 1.3.1.5动物线粒体 优选动物肌肉组织（如胸、腿部）对于类似虱子、蚜虫等等可送整只虫体。取样量1-2g。 1.3.2送样量建议
1.4 RNA相关项目组织样本 1.4.1 制备建议 处于不同发育阶段以及不同⽣长条件的样本中所含有的RNA的量是不同的，在某些实验条件下或某些病变部位获得的样本中RNA的量可能与常规相应样本有显著的差异。存储条件以及存储时间也是影响RNA得率的关键因素，一般来说从新鲜的样本中总是能够的到预期的RNA产量，但是没有保存在液氮或者-80°C冰箱中的样品是不可靠的。即使是保存在液氮或者-80°C 冰箱中的样品，如果存储时间过长，RNA产量也会显著降低。因此，实验中的细胞样本的需要量只能以本公司的抽提结果为准。 PS：送样样本尽量不要加保护剂，例如Trizol等。 1.4.1.1细胞样本 我们不接受不经Trizol试剂处理的细胞样本。客户如果提供冻存可复苏的细胞株，应首先验证所用的冻存⽅法用于RNA提取的可靠性，并且在送样时提供详尽的复苏⽅法，以便确保实验成功。 1.4.1.2原核菌体 收集对数期的菌液（OD600：0.8-1），确定细菌数量；取3-5ml的菌液离心去上清后置于1.5ml 离心管（RNase-free）中，；菌体沉淀放入液氮速冻，一个样本提供3-5管菌体；液氮速冻后的样本，放-80℃保存，干冰送样； 1.4.1.3血液样本 新鲜血液离心后分离血浆，也可以自己提取RNA。 或者采用BD 静脉真空采血管（全血 RNA 管）保存血液。 PS：全血无法做转录组，全血中含有很多beta珠蛋白，RNA会被大量珠蛋白污染，除非采用剔除珠蛋白的试剂盒。 1.4.1.4植物样本 尽量选取新鲜、幼嫩、生长状态良好的组织部位；纯净水或75%乙醇擦拭或冲洗组织表面；组织样本锡箔纸包好，置于冻存管，液氮速冻，-80℃长期保存，干冰运输。 1.4.1.5动物样本 动物组织的新鲜样本简单切碎放入5倍体积RNAlater保存，干冰运输；细胞样本离心富集，PBS重悬清洗，加入RNAlater或液氮速冻保存，干冰运输。 1.4.2送样量建议
1.5 代谢及蛋白相关项目组织样本 1.5.1 样品制备要求 （1）代表性和一致性原则：各组样本在取材部位、时间、处理过程等方面尽可能保持一致；取样部位要具有代表性，准确的分离病变组织和对照组织；针对高异质性组织，更需要做到精确取材； （2）迅速性原则：样本在采集、制备、分离、冻存等过程中应尽可能做到迅速，尽量减少操作过程过长对样品产生的影响。 （3）全程低温原则：所取样本离体后，如有分离步骤应在低温下进行，分离好的样品立即置于液氮、干冰或-80℃冰箱中，并在实验前始终处于-70℃以下，切忌反复冻融，以避免蛋白的降解。注：液体样本在冷冻之前保持竖立，确保全部样本留存在管底再冻存。 1.5.2代谢组学制备建议 1.5.2.1动物组织类 （1）动物组织样本：若取整个组织采用灌流法，用预冷的去离子水去除组织中的血液残留；若取部分组织则在破碎组织后用预冷的去离子水漂洗掉血液残留； （2）人组织样本：小的活检样本，快速用预冷的去离子水冲洗，去除血液残留；根据具体实验设计取特定的部位，250 mg/sample 装入离心管中；做好标记后迅速放入液氮中冷冻处理至少15min；-80°C冰箱冻存。足量干冰寄送。 （3）对于类似斑马鱼大脑组织、小鼠海马组织等单个实验动物组织重量较小的样本，请咨询凌恩生物。 1.5.2.2细胞 （1）细胞样本处理步骤 （a）悬浮细胞样本：离心收集悬浮细胞，用预冷的PBS快速清洗 2～3次，4°C，1000g低速离心1min，弃去上清，收集细胞（细胞沉淀50μL）于2 mL进口离心管中，液氮速冻15min，-80°C保存，足量干冰运输。 （b）贴壁细胞样本（非靶&类靶）：将培养好的细胞去除培养基，用预冷的PBS清洗2～3次，弃去上清，最后加入1mL预冷的80%的甲醇水溶液（色谱级），使用细胞刮将培养容器中所有细胞都刮取干净，进行细胞计数（107），转入2 mL进口离心管（冻存管）中，液氮速冻15min，-80°C保存，足量干冰运输。（建议设置复孔采用胰酶消化法进行细胞计数） （c）靶向代谢贴壁细胞样本：将培养好的细胞去除培养基，用预冷的PBS清洗2～3次，再加入少量PBS，用细胞铲刮下细胞，置于1.5mL离心管中，4℃，1000g低速离心1min，弃去上清，收集细胞于2mL进口离心管中，液氮速冻15min，-80°C保存，足量干冰运输。（设置复孔采用胰酶消化法进行细胞计数） （2）细胞培养基（研究细胞外代谢）处理步骤 吸取大于5mL贴壁细胞的培养基，1000g，4°C离心 1min，取全部上清，液氮速冻15min，冻存到－80°C冰箱内，足量干冰寄送。贴壁细胞PBS冲洗后尽可能去除干净上清，保证后续加入1mL甲醇水溶液后各样本的样本量一致。 1.5.2.3血浆、血清代谢组学样本处理方法 （1） 血浆样本处理步骤 推荐使用肝素钠抗凝管采集全血，幵尽快进行血浆分离：3000rpm 4°C离心 10min,取上层，0.2mL/管分装至2 mL 离心管中。做好标记后，液氮速冻15 min，-80°C冰箱冻存。足量干冰寄送。 （2）血清样本处理步骤 血液收集在离心管或真空采血管中 37°C（或室温）静置 1h 进行凝固分层。然后 3000rpm离心5min，取上清转至干净的离心管中。再 12000rpm 4°C离心10min，取上清分装到2 mL 离心管中，每管 0.2mL，做好标记后，液氮速冻15min，-80°C冰箱冻存。足量干冰寄送。 1.5.2.4 植物类 （1）叶片、茎、花 取整片叶片/一段茎/一朵花，用锡箔纸包裹幵标记后，迅速放入液氮中冷冻处理至少 15min。取出后迅速放入自封袋中（每组一袋），在自封袋中放入标签纸注明样本信息。迅速放入-80°C 冰箱冻存。足量干冰寄送。 （a）采集叶片样本时，最好在中午光照好的时间收集。 （b）根据实验设计，采集样本时保持样本一致性，尤其是同一组样本（颜色、衰老程度、叶脉占比、光照、位置等）。 （c）由于锡箔纸上 marker 笔标记容易模糊，所以建议同时在自封袋中放入标签纸注明。 （2）根 取整株植物的根部，迅速用 1×PBS 漂洗掉根上的泥土。根据具体实验设计取植株根特定的部位，500mg/sample 装入离心管中。做好标记后迅速放入液氮中冷冻处理至少 15min。-80°C冰箱冻存。足量干冰寄送。 （a）PBS漂洗时间要尽快； （b）由于根部组织特别脆弱，被挤压后会变成浆糊状，所以推荐保存至离心管中，不建议用锡箔纸包裹。 （3）果实、种子 对于含多汁、块头较大的果实（番茄、西瓜、苹果等）需要先用锋利的刀分割成“均匀”合适的小块（≈250mg/sample）分装至 2mL 离心管中，做好标记后迅速放入液氮中冷冻处理至少15min。 对于细小的颗粒种子（拟南芥种子、谷物种子等），可以先将同一组的植株种子混匀后再分装（≈250mg/sample）至2 mL 离心管中。做好标记后迅速放入液氮中冷冻处理至少 15min。3）对于要求对整个果实进行提取的（整粒葡萄等），需要把果实装在 50mL 离心管中/自封袋中，做好标记后（同时放入自封袋中标签纸，注明样本信息）迅速放入液氮中冷冻处理至少 15min。 对多汁的果实进行取样很难保持均一性（如番茄、皮、果肉、果瓤、籽的占比），强烈建议将整个果实进行研磨、冻干，对粉末进行称重分装。不推荐用锡箔纸包裹。 （其他详见代谢组送样要求） 1.5.3代谢组学送样量建议
1.5.4蛋白组学制备建议 1.5.4.1植物组织 选取干净的目标部位组织，取材均一。若组织为果肉，需低温环境中去掉果皮和种子等；若有污物，离体前可以用水洗掉杂质，离体后可用预冷的PBS清洗污染物，用无尘纸吸干；将样品剪切成小块，装入预冷的离心管中，在液氮速冻5min以上，-80℃冰箱保存。柔软组织建议800mg~1g；木本植物的根、皮、枝等建议8g~50g；果实种子建议2g-5g。 1.5.4.2动物组织 选取干净的目标部位组织，取材均一。用生理盐水或PBS溶液清洗组织，无尘吸水纸快速吸去残留液体，将组织剪切成0.5cm小块或100mg左右小块，将组织块液氮速冻后，再装入预冷的冻存管中，液氮速冻5min以上，转移至-80℃冰箱冻存。软体动物先PBS洗涤去除污染物，再进行如上处理。建议送样量为200mg~2g。 1.5.4.3血浆 采集血液样本，建议使用BD EDTA血常规管（含抗凝剂），条件允许的情况下，可以选择BD Vacutainer®蛋白质组学产品BD P100组件或BD P800采血管（含抗凝剂和蛋白酶抑制剂）。采血后轻轻地180度上下颠倒混匀，持续8~10次，以混匀血液和添加剂，然后立即4℃，≤1300×g（根据物种稍微进行调整）离心10min。移液器将血浆转移到离心管中，立即添加蛋白酶抑制剂（如有条件），混匀后瞬时离心。最后将样品分装到0.5mL离心管内，每管150μL，-80℃冷冻样品。 1.5.4.4血清 收集全血至真空采血管（如BD vacutainer公司的红头真空采血管），4℃放置30~120min，4℃，≤1300×g（根据物种稍微进行调整）离心10min，移液器将血清转移到离心管中，立即添加蛋白酶抑制剂（如有条件），混匀后瞬时离心，最后将样品分装到0.5mL离心管内，每管150μL，-80℃冷冻样品。 1.5.4.5悬浮细胞 悬浮细胞培养至适当的密度后，800×g离心5~10min收集细胞至离心管中；弃上清后，PBS溶液洗三遍，每次均需要800×g离心5~10min，收集细胞至离心管中，最后用1mL PBS重悬细胞，转移至1.5mL离心管中，12000rpm离心1min，弃上清后再次快速离心5-10s，用移液器将残留液体完全吸弃，每管细胞沉淀体积保持在50μL左右，准备2~3管；液氮速冻后，-80℃冰箱保存。建议送样量5×106个（50μL细胞沉淀）。 （其他详见蛋白质组送样要求） 1.5.5蛋白组学送样量建议 1.5.5.1定性蛋白质组
1.5.5.2外泌体蛋白质组（Label-free）
1.5.5.3定量蛋白质组
1.5.5.4修饰蛋白质组
1.2 eDNA相关项目组织样本 1.2.1 制备建议 1.2.1.1水体样本 准备2L采样瓶，对采样瓶先用超纯水冲洗两次，将10％漂白剂浸没10分钟，然后用超纯水再次冲洗两次，备用。带手套将采样瓶没入水中，装满之后拿出，封口。取1-2 L左右水，使用0.22um滤膜过滤（有大颗粒杂质是可先过滤0.45um滤膜）。滤膜置于冻存管中，至少重复4管。注意：由于环境DNA存在一定的衰减，收集到水体后请尽快过滤膜。动植物细胞会存在一定损失。同一水域多次采集，一般每个样品做3-10个平行样，尽量覆盖采集区域以增加检测到目标物种的概率。样品珍贵，请老师做好好备份样本采集和保存。（其他方法请参照“环境DNA水体采样方法”） 1.2.1.2土壤样本（方法同1.1.1.3） 1.2.1.3活性污泥 从活性污泥装置中取大于10 ml的悬浮污泥样本（约5-10 g沉降物），保存无菌EP管中，放入液氮或置于冰上，立即运至实验室进行核酸提取，或-80℃保存备用。注：若液态污泥样本沉降物较少，可适当增加取样量。 1.2.1.4水体/地表沉积物 取距离水底/地表0-10 cm（具体按实验需要而定）的沉积物5~10 g，保存无菌取样袋或EP管中，置于冰上运送至实验室进行核酸提取，或-80℃保存备用。若不能自行提取，可置于干冰寄送至公司提取。 2 核酸样本送样建议 2.1 制备建议 （1）由于三代测序对样本质量要求较高，请务必按照以下送样标准，并仔细纯化样本，尽量避免多糖、蛋白质等残留。样本需要标注溶剂成分，溶解DNA的缓冲液不可含有EDTA，核酸样本不许含有以下物质：颗粒物质、螯合剂、二价金属阳离子、变性剂和洗涤剂、荧光染料，不得是EB凝胶回收产物。核酸样本不可反复冻融，不可存放于高温、极端PH环境中，建议干冰运输。 （2）DNA可溶解在TE buffer或ddH2O中，样品送样前需保持在4℃，碎冰邮寄，或根据具体情况用干冰邮寄，切忌反复冻融； （3）总RNA 于-80°C 冰箱保存，干冰运输。也可制成干粉，4°C（冰袋或碎冰）运输。 （4）含乙醇的DNA样本需提前告知 （5）所有的核酸样品，需要保存在1.5ml或2ml的EP管中。 2.2 送样量建议 2.2.1 DNA （1）DNA送样要求：
（2）PCR送样要求：浓度≥ 10 ng/μL，总量≥ 500 ng；条带单一、无接头污染、无引物二聚体、无降解，OD260/280:1.8-2.0，OD260/230 ≥1.0。 （3）核酸送样要求：浓度≥ 100 ng/μL，总量≥ 1 μg；OD260/280 ≥1.5，OD260/230 ≥1.0；2. 需要提前确定其致病性；3. 需提前确认是否需要富集。
2.2.2 RNA
2.2.3双链cDNA 浓度不低于5-10ng/μl，总量2μg以上。（提示：需进行去rRNA操作） 3 客户自建库文库送样建议 总量≥100 ng；浓度≥5 ng/μL；纯度OD260/280在1.8-2.0之间；DNA完整无降解，无RNA、蛋白质、多糖等污染。 构建PE文库，插入片段大小430bp（默认） 4 样本打包及寄送建议 4.1 样本的打包 4.1.1 组织样本 （1）建议根据送样量使用不同规格带螺纹帽的EP管、冻存管或者离心管装载组织样品，并用封口膜封口。 （2）为防止样品管在运输过程中受到干冰挤压破裂，最好将样品管放到50ml离心管或其他支撑物中，并在支撑物里添加棉花或卫生纸缓冲。大量样品建议将EP管放置在冻存盒中，并在冻存盒外面包裹气泡垫。 （3）使用锡箔纸、自封袋装载的样品，为防止运输中受挤压破损，建议将锡箔纸折叠整齐装在自封袋中，在样品包装外再用气泡垫包好并固定。 （4）对于血液样品，建议采用5-10ml 塑料抗凝采血管装载，为了防止运输过程中采血管因挤压而损坏，需要将每支采血管管身均用气泡垫包好，然后放置到塑料或纸质包装盒中。 （5）为便处理和保存，组织样品送样量请不要超过建议送样量的5倍（特殊的得率较低的样品除外）。 4.1.2 核酸样本 （1）核酸样品建议使用质量好的1.5ml或2ml 低吸附EP管装载样品，并用封口膜封口。为了防止样品管破裂，或者污染和混乱，请不要使用诸如PCR管、0.5ml EP管、八联管、96孔板、深孔板等非标准管送样。非标准管不利于样品保存以及后续实验的进行。如有样品使用非标准管制备，还请在送样前自行转管处理。 （2）为了防止样品运输途中由于干冰挤压而损坏，少于10管的样品建议将EP管放入50ml离心管，并在50ml离心管中用棉花或卫生纸固定；大量样品建议将EP管放置在冻存盒中，并在冻存盒外面包裹气泡垫。 （3）用乙醇沉淀的样品由于运输中会有少量乙醇挥发出，建议将样品管盖用封口膜缠绕4-5圈。 4.2 样本的名称标识 （1）所有的样品必须具有清晰的标记，并且简洁明了。 （2）使用锡箔纸包装的组织样品建议在锡箔纸内外均标记样品名称，并将锡箔纸放在自封袋中，自封袋外面再标记上样品名称，防止锡箔纸上样品名称模糊引起样品混乱。 （3）使用乙醇沉淀的核酸样品，由于挥发出的乙醇会使Mark笔的标记模糊，建议用油性笔将样品名称写在标签纸上，然后用透明胶带将标签纸粘贴在样品管壁上，并缠绕2-3圈。 （4）样品名称建议使用“字母+数字”命名方式标注在管盖。其他信息如日期、浓度、物种等可标注在管壁。所有标注内容需与《样品信息单（寄样）》保持一致。 附件 1 《人间传染的病原微生物名录》
附件 1 《人间传染的病原微生物名录》
*部分病原微生物名录，详细列表请参考卫生部印发的《人间传染的病原微生物名录》。 |
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